产品介绍
本试剂盒以血液为模板直接进行DNA扩增,扩增产物可直接点样电泳。该试剂盒中含有设计的Taq酶突变体,这些使它能够耐受全血样品中存在的抑制剂。在大多数抗凝剂存在下,包括肝素、柠檬酸和EDTA等,Taq酶依然扩增性能良好。由于其可以从血液直接进行扩增,免除了繁琐的DNA提取步骤,加快了工作流程,降低了污染的风险。
产品特点
1. 简便:无需事先对血液进行提纯,直接用血液为模板扩增目的基因;
2. 高效:多数抗凝剂存在条件下,超强的抗抑制能力,能有效扩增杂质较多的模板。
产品用途
1.未加抗凝剂的血液样本;
2.添加了肝素、柠檬酸、EDTA 等抗凝剂的血液样本;
3.血液基因组扩增检测。
使用建议
1.使用时添加≤10%的全血为模板,若扩增不出目的条带, 酶量可加倍。加上血液后将管中各组分轻轻混匀。
2.2mM Mg2+可以满足绝大多数 PCR 扩增,对于某些 PCR, 为了保证较好的扩增,可调
节为 2-5mM。
保存温度
-20℃保存。
产品组分
产品组成
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体积
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2 × Direct Blood PCR Buffer (with Mg2+)
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1.25ml
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dNTPs(各 10mM)
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100μl
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Direct Taq DNA 聚合酶(400U)
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100μl
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使用方法
常用反应体系 (25μl):
2 × Direct Blood PCR Buffer (with Mg2+*)
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10μl
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上游引物
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0.2-1.0 μM(终浓度)
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下游引物
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0.2-1.0 μM (终浓度)
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dNTPs(各10mM)
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1μl
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全血
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0.1-2.5μl
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Direct Taq DNA 聚合酶(400U)
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1μl
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ddH2O
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至 25 μl
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*Mg2+终浓度为 3.5mM
常用PCR设置
当扩增片段<3K
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当扩增片≥(推荐引物长度≥30bp)
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94℃, 1 分钟 30 秒
94℃,20 秒
55-60℃,20 秒 30-40循环
72℃,1kb/60 秒
72℃ 5 分钟
4℃ 保温
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94℃, 5 分钟
94℃,15 秒 30-40循环
68℃,1kb/60 秒
72℃ 5 分钟
4℃ 保温
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